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荧光染料-CFSE做为活细胞标记的特点 (2010-6-22)

 

荧光染料-CFSE做为活细胞标记的特点
 

 

 

5- or 6-(N-Succinimidyloxycarbonyl)-3',6'-O,O'-diacetylfluorescein
羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯
产品描述:
荧光染料CFSE(CFDA-SE),是一种可对活细胞进行荧光标记的新型染料,可以标记活体细胞。其基本原理如下:CFSE能够轻易穿透细胞膜,在活细胞内与胞内蛋白共价结合,水解后释放出绿色荧光。在细胞分裂增殖过程中,它的荧光强度会随着细胞的分裂而逐级递减,标记荧光可平均分配至两个子代细胞中,因此其荧光强度是亲代细胞的一半,根据这一特性,它可被用于检测细胞增殖,细胞周期的估算及细胞分裂等方面。
另外CFSE标记的细胞用于体内观察可以长达数周之久,它常被用来做活体细胞检测实验和用荧光电镜观察细胞长期活动的实验。
荧光探针CFSE进入细胞后定位于细胞膜、细胞质和细胞核,在细胞核的荧光染色最强,并证实CFSE不影响细胞的增殖能力。
此方法操作简单,且不用放射性同位素,不存在安全隐患。可以更快速,更准确和更安全的得到想要的实验数据。

荧光染料CFSE是一种很有价值的细胞标记示踪剂,不仅用于细胞增殖的体外实验,也可用于追踪细胞在体内的分裂增殖过程。

 


 

 

 

优点:

1.      活体标记:可以追踪细胞在体内的分裂增殖过程。

2.      时间长:标记的荧光可以维持长达数周之久。

3.      安全:不需使用放射性同位素。

4.      相关性高:与H3掺入法结果一致,可代替后者。

5.      特定跟踪:可以与细胞亚群特定抗体结合使用。

6.      简单:操作简单,可靠。

7.      稳定:进入细胞后荧光不受内环境影响。

8.      结果客观:对细胞生理活动没有任何影响。

9.      经济实惠:费用经济,效率高。

用途:

1.       细胞增殖检测(尤其是淋巴细胞的增殖检测)。

2.       体内示踪。

3.       细胞荧光标记。

4.       细胞毒性检测。

其他:

1.      检测仪器:荧光显微镜,流式细胞仪,CO2培养箱,移液器等

2.      激发波长:500nm

3.      发射波长:520nm

4.      细胞定位:胞核最强,胞膜次之。

另附:

配制

染色过程(操作简单)

DMSO溶解成1 mmol/L的储存液(1mg CFSE溶解于1,800μl DMSO即是1mM Stock Solution),于- 20 避光保存。使用时,用PBS、无血清培养基或适当的缓冲液将其稀释成10-50 μMCFSE溶液(具体浓度需要根据自己的实验情况而定)

 

1.    1/10细胞培养基体积的CFSE溶液加入到细胞培养基中。

2.      37培养细胞15-30min

3.      PBS或其他缓冲液洗涤细胞两次。

4.      加入合适的培养基制成细胞悬液。

5.      10ul细胞悬液滴在载玻片上,用荧光显微镜观察,看到荧光后根据自己的实验要求调整细胞数量进行实验。

注意:

a)尽可能用不含血清的培养基,血清中的酶和蛋白质会分解CFSE,可能会影响染色效果。

b)要根据细胞种类摸索最佳染色条件,若荧光强度不够或细胞死亡过多,需调整CFSE的用量和培养时间。

c 根据不同的实验目的和要求,采用稀释的方法调整细胞数量。

d)在-20避光条件下保存。