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Ab-10 Rapid HiLyte Fluor 647 Labeling Kit
货号: LK36

HiLyte Fluor 647快速标记试剂盒(微量)
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3 samples2210现货

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          Ab-10 Rapid HiLyte FluorTM 647 Labeling Kit可以快速(在30分钟内)并简便地在10 μg抗体上标记HiLyte FluorTM 647。Reactive HiLyte Fluor 647(该试剂盒的成分之一)具有琥珀酰亚胺酯基团,不需要任何活化就能够轻易地与目标抗体的氨基基团形成共价键。试剂盒内包含标记抗体所需的试剂。
特点:
  1、适合标记10 μg的昂贵抗体
  2、速度快,在30分钟内完成标记
 
标记步骤:
注意
从密封袋中取出一个Reactive HiLyte Fluor 647后,将剩余未使用的Reactive HiLyte Fluor 647放在袋子里,
密封并保存在-20℃。其它试剂保存在0-5℃。
试剂盒内含:
Reactive HiLyte Fluor  647         3管
Reaction Buffer            100 μl ×1管
Stop solution                100 μl ×1管
 
储存条件:
在0-5℃保存。该试剂盒未开封放在0-5℃,可保存1年。
 
所需的设备和材料:
—20 μl可调式移液器    —微型管(用于样品制备)
—37℃培养箱               —PBS
 
注意事项:
1、用0.5-1 mg/ml的抗体溶液进行标记。如果抗体浓度超过1mg/ml,请用PBS稀释抗体溶液。
2、如果样品溶液中含有小的不溶物,请离心溶液后取上清液进行标记。
3、试剂盒中的微型管内含有溶液,由于液滴可能会附着在管壁或管盖上,在打开前请先振荡下来。
4、抗体在标记后,有个别种类的抗体可能会失去抗原识别能力,如有问题请联系我们。
5、一些抗体溶液中的添加物例如BSA或甘油,当浓度过高时会影响标记并产生非特异性信号,我们建议在标记前先去除。可添加物(○)和不可添加物(×)详见表1,部分添加物可使用的最大浓度详见表2。
 
              表1. 可添加物和不可添加物
添加物  
缓冲液(PBSHEPES
氯化钠
螯合剂(EDTA
叠氮化钠
伯胺和硫醇 ×
 
                                           表2.添加物可使用的最大浓度
  葡萄糖 甘油 BSA 凝胶 Tris
抗线粒体抗体 <10% <10% <2% <0.1% <50mmol/l
抗肌动蛋白抗体 <5% <10% × <0.1% <25mmol/l
HNF4α抗体 <2% <10% <0.05% <0.02% <50mmol/l
*干扰和非特异性信号的大小取决于抗原、抗体宿主或化学成分。
 
操作步骤:
1、添加0.5-1 mg/ml的抗体溶液至微型管中,抗体量为10 μg
2、
在抗体溶液中加入Reaction Buffer并吹打混匀。
  *Reaction Buffer的体积为抗体溶液体积的1/10(表3)。
3、取上述溶液至Reactive HiLyte Fluor 647管中并吹打混匀。
4、在37℃培养10 min。
5、添加Stop Solution至上述溶液中,吹打混匀。
  *Stop Solution体积为抗体溶液体积的1/10(表3)。
6、在室温培养10 min。
7、将标记好的样品保存在0-5℃或适宜的条件。
 
*标记好的抗体在4℃可以保存2周。
 
                                              表3. Reaction Buffer和Stop Solution的体积
抗体浓度(mg/ml 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0
Reaction Bufferμl 2.00 1.67 1.43 1.25 1.11 1.00
Stop Solutionμl 2.00 1.67 1.43 1.25 1.11 1.00
 
附加信息:
线粒体染色
1、
将Hela细胞接种至8孔U型板(ibidi)中,并在37℃ 5% CO2 培养箱中过夜培养。
2、用PBS清洗细胞3次,将含有4%多聚甲醛的PBS加入U型板中。
3、将U型板放在室温培养15 min。
4、用PBS清洗细胞3次,将含有1%Triton-X的PBS加入U型板中。
5、将U型板放在室温培养30 min。
6、用PBS清洗细胞三次后,立刻将PBS配制的封闭液加入U型板中。
7、将U型板放在室温培养1 h。
8、用封闭液稀释HiLyte Fluor 647标记的抗线粒体抗体200倍。
*抗线粒体抗体购自Abcam(产品货号:ab3298)
9、去除上清液并将步骤8的溶液加入U型板中。
10、将U型板放在0-5℃过夜培养。
11、用PBS-T清洗细胞3次后,在U型板中加入PBS-T。
12、在荧光显微镜下观察细胞。
 
   
        
Hela细胞的线粒体荧光成像图