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Ab-10 Rapid R-Phycoerythrin Labeling Kit
货号: LK34

R-藻红蛋白抗体快速标记试剂盒(微量)
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3 samples2210现货

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      Ab-10 Rapid R-Phycoerythrin Labeling Kit可以快速(在30分钟内)并简便地在10 μg抗体上标记R-藻红蛋白。Reactive R-Phycoerythrin(该试剂盒的成分之一)具有琥珀酰亚胺酯基团,不需要任何活化就能够轻易地与目标抗体的氨基基团形成共价键。试剂盒内包含标记抗体所需的试剂。
  特点:
    1、适合标记10 μg的昂贵抗体
    2、速度快,在30分钟内完成标记
 
  标记步骤:
注意
从密封袋中取出一个Reactive- Phycoerythrin后,将剩余未使用的Reactive- Phycoerythrin
放在袋子里,密封并保存在-20℃。其它试剂保存在0-5℃。
试剂盒内含:
- Reactive R-Phycoerythrin            3管
- Reaction Buffer              100 μl ×1管
- Stop Solution                 100 μl ×1管
 
保存条件:
在0-5℃保存。该试剂盒未开封放在0-5℃,可保存1年。
 
需要的仪器和材料:
—20 μl可调式移液器    —微型管(用于样品制备)
—37℃培养箱              —PBS
 
注意事项:
1、用0.5-1 mg/ml的抗体溶液进行标记。如果抗体浓度超过1 mg/ml,请用PBS稀释抗体溶液。
2、如果样品溶液中含有小的不溶物,请离心后取上清液进行标记。
3、试剂盒中的微型管内含有溶液,由于液滴可能会附着在管壁或管盖上,在打开前请先振荡下来。
4、抗体在标记后,有个别种类的抗体可能会失去抗原识别能力,如有问题请联系我们。
5、一些抗体溶液中的添加物如果浓度过高可能会影响标记,这些添加物可使用的最大浓度详见表1。
                   表1. 添加物可使用的最大浓度
添加物  
缓冲液(PBSHEPES
氯化钠
螯合剂(EDTA
糖类(葡萄糖、海藻糖)
甘油 < 50%
叠氮化钠 < 0.1%
BSA* < 1%
凝胶 < 0.1%
Tris < 50 mmol/l
伯胺和硫醇 ×
*BSA会产生非特异性信号,建议在标记前先去除BSA。
 
操作步骤:
1、添加0.5-1 mg/ml的抗体溶液至微型管中,抗体量为10 μg。
2、 在抗体溶液中加入Reaction Buffer并吹打混匀。
* Reaction Buffer的体积为抗体溶液体积的1/10(表2)。
3、取上述溶液至Reactive R-Phycoerythrin管中并吹打混匀。
4、在37℃培养10 min。
5、添加Stop Solution至上述溶液中,吹打混匀。
 *Stop Solution体积为抗体溶液体积的1/10(表2)。
6、在室温培养10 min。
7、将标记好的样品保存在0-5℃或适宜的条件。
 
*标记好的抗体在4℃可以保存2周,如需保存更久,加入相同体积的甘油至样品溶液中,并在-20℃保存。
                                   表2. Reaction Buffer和Stop Solution的体积
抗体浓度(mg/ml 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0
Reaction Bufferμl 2.00 1.67 1.43 1.25 1.11 1.00
Stop Solutionμl 2.00 1.67 1.43 1.25 1.11 1.00
 
附加信息:
HL60细胞的荧光染色
1、 添加5×105个HL60细胞至微型管中。
2、 1,000×g离心2 min后去除上清液。
3、 吸取50 μl混悬液(1%FBS(胎牛血清),Hank‘s平衡缓冲液)至微型管中。
4、 将R-Phycoerythrin标记的1 μg抗体加入管中,并吹打混匀。
* Anti-CD13抗体购自Becton Dickinson(货号:555393)。小鼠IgG(同型)购自Jackson Immuno Resarch Laboratories(货号:015-000-003)。
5、将管子放在冰浴中30 min。
6、1,000×g离心2 min后去除上清液。
7、吸取1 ml混悬液至微型管中,并吹打混匀。
8、用流式细胞仪检测染色的细胞。
 
                                      用R-Phycoerythrin标记的抗体染色的HL60细胞