U.S.A | EUROPE | JAPAN
  • 分 子 式:
  • 分 子 量:
  • 外      观:
  • 别      名:
  • 纯      度:
  • 储存条件: 0-5
  • 运输条件: 室温
搜索产品
您现在的位置:首页 > 产品中心 > 蛋白质抗体标记 > Allophycocyanin Labeling Kit-SH
Allophycocyanin Labeling Kit-SH
货号: LK24

别藻蓝蛋白标记试剂盒-巯基
CAS号:
规格
价格
到货期
3 samples3860现货

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

特点:整个标记过程仅需3个小时

            整个标记过程在1支过滤管中进行   

            荧光标记抗体回收率高                                
            
适用于50-200 μgIgG                   

     

藻胆蛋白是一种从蓝藻和真核藻类中得到的荧光蛋白,它的荧光强度要比化学荧光探针,如荧光素和罗丹明高得多。因此,用藻胆蛋白标记的抗体和其他分子在做流式细胞术和免疫染色时具有很高的灵敏度。别藻蓝蛋白(APC)是一种藻胆蛋白,它在660 nm附近有蓝色荧光,激发波长为488 nmAllophycocyanin Labeling Kit-SH能够简便快速地制备被APC标记的IgGSH-reactive APC(该试剂盒的成分之一)具有一个马来酰亚胺基,不需任何活化就能够轻易地与靶分子中的巯基形成共价键。试剂盒中的Filtration tube能够快速交换缓冲液和浓缩样品IgG溶液。该试剂盒中包含了标记所需的全部溶液,包括制备带有SH的还原型IgG所需的还原剂以及储存标记产物的Storage buffer

*APC: Allophycocyanin (别藻蓝蛋白)

试剂盒内含
SH-reactive APC……200 μg × 3
          Reducing agent……………3
WS buffer…………4 ml × 1
                  Reaction buffer……………200 μl × 1

Filtration tube……3                             RA solution…………………1 ml × 1
 

注意事项:
 
用该试剂盒标记的蛋白质的分子量要>50,000
 
在标记过程中,IgG或者Allophycocyanin-IgG标记物始终在Filtration tube的滤膜上。
 
如果IgG溶液中含有分子量>10,000的其他蛋白质,如BSA或明胶时,在使用该试剂盒标记前,先要纯化IgG溶液。IgG溶液能够用IgG Purification Kits(不包含于本试剂盒中)来纯化。
 
如果IgG溶液含有小的不溶物,离心后取上清液来进行标记。

 

标记IgG操作步骤:
1)将100 μl WS buffer以及含有100 μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。a
2)用移液器使溶液混合,然后8,000-10,000 g离心10分钟。b
3)将150 μl WS buffer加入到Reducing agent中并用移液器吹打数次使其溶解。
4)从步骤3所得的溶液中,取100 μl转移到IgG所集中的过滤管的滤膜上。
5)用移液器吹打数次后,37培养30分钟。
6)将100 μl RA solution加入到管中,8,000-10,000 g离心10分钟。弃滤液,加入200 μl RA solution,再离心一次。b
7)将50 μl Reaction buffer加入到SH-reactive APC并吹打其溶解。
8)将所得的SH-reactive APC溶液转移到被还原的IgG所集中的过滤管的膜上。
9)用移液器吹打数次后,37培养1小时。
10)加入150 μl WS buffer并吹打10-15次来回收标记产物。c将该溶液转移至0.5 ml试管中,在0-5下保存。d


a
)样品溶液的体积不应超过100 μl。如果抗体浓度低于0.5 mg/ml,重复步骤12直至总的IgG聚积量达到100 μg
b
)如果溶液在离心后仍然残留在膜上,可以再离心5分钟或者适当增加转速。
c
)标记后产物的浓度为1.4-1.8 mg/ml。在进行后续的酶免疫,免疫印迹,免疫转染试验前先要将标记后的IgG稀释至适当的浓度。每个IgG分子上会被标记上1-2APC分子。没有被结合的APC可能会干扰正常的免疫试验。如果需要纯化的话,可以使用凝胶渗透柱或亲合柱。
d
)通常APC标记后的IgGStorage buffer中,0-5下至少能够保存2个月,如果需要保存更久,可以添加等量的丙三醇(终浓度:50%),并在-20下存放。但是,还要注意样品自身是否稳定。

1.能够使用这个试剂盒标记F(ab’)2吗?

可以标记。请参照标记IgG的操作说明,回收率通常都超过80%。

2.能够用这个试剂盒标记其他蛋白质或者多肽吗?

可以,只要标记分子的还原型分子量>50,000且具有活性巯基结构或者可被还原且不会失活的二硫化物。参照IgG的标记操作说明,使用0.5-1 nmol蛋白样品。

3.能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗?

不行。寡核苷酸或者寡肽可能因为分子量太小而不能存在于滤膜上。

4.每个IgG能够标记多少个APC分子?

每个IgG平均能标记上1-2个APC分子。

5.标记蛋白之前是否必须使用过滤管?

如果蛋白溶液中不含有带有活性巯基的小分子且蛋白浓度在10 mg/ml或者70 μM时,可以不使用过滤管来过滤,只需要将10 μl 样品溶液和Reaction Buffer混合并加入到SH-reactive APC管中即可。

6.是否必须要使用试剂盒所包含的WS Buffer?

是的,要用WS Buffer来制备标记产物的储存液。但是,可以选择任何适合于该实验的缓冲液来稀释储存液。