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  • 分 子 式: C29H19NO11
  • 分 子 量: 557.46
  • 外      观: 白色或浅黄色粉末
  • 别      名: CFDA-SE
  • 纯      度: 95%以上(HPLC)
  • 储存条件: -20
  • 运输条件: 室温
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CFSE
货号: C375/C309
5- or 6-(N-Succinimidyloxycarbonyl)fluorescein 3',6'-diacetate
5(6)-羧基二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯
CAS号: 150347-59-4
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到货期
C375:1 mg986现货
C309:10mg2160期货

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  • 参考文献
 

CFSE(CFDA-SE)是一种可对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂,CFSE 进入细胞后可以不可逆地与细胞内的氨基结合偶联到细胞蛋白质上。在细胞分裂增殖过程中,CFSE 标记荧光可平均分配至两个子代细胞中,因此其荧光强度是亲代细胞的一半,用流式细胞仪或荧光显微镜在490 nm 激发光处可对其进行分析。荧光探针CFSE进入细胞后定位于细胞膜、细胞质和细胞核,在细胞核的荧光染色最强,并证实CFSE不影响细胞的增殖能力。

荧光染料CFSE 是一种很有价值的细胞标记示踪剂,不仅用于细胞增殖的体外实验,也可用于追踪细胞在体内的分裂增殖过程。

染色例:
      

 

 

 

 

 

 

*同仁化学研究所需要根据老师具体的实验目的,提供给老师更加详细的技术服务,以保证老师实验顺利、成功。
*建议您在正式实验前先摸索一下细胞量、CFSE的终浓度、培养时间等,找到最佳实验条件。
配制试剂:
1、从冰箱中取出CFSE试剂,放至室温后再打开。盛放CFSE的管子开盖前请轻弹管壁几次,让粉末充分落入管底,必要时可采用离心的方法。
2、取0.9 ml DMSOa)加到CFSE管中溶解,配制成2 mM的CFSE母液b)(加入DMSO后请先盖上盖子,反复颠倒把盖子和管壁上的试剂洗到底部,并用移液器反复吹打使溶解完全)。
3、用PBS(-)或适当的缓冲液将其稀释成100 μM或其它浓度(如果采用载玻片观察法,建议浓度为20 μM)的工作液c)。
a) DMSO需要保证新鲜无水,否则将会导致AM体水解,使荧光染料无法进入细胞,影响实验效果。
b) 由于CFSE母液遇水极易分解,所以建议分装保存,例如分装成5 μl/管。
方法:分装后用封口膜密封管口,再用锡箔纸包裹,最后和干燥剂一起用塑料袋密封,≦-20℃冷冻保存。
c) CFSE工作液应现配现用,因为CFSE吸水会分解,影响染色效果。
* PBS(-):不含钙和镁离子的PBS。
细胞染色(仅供参考):
例1  培养板观察法
1、准备细胞悬液,用PBS(-)等合适的培养基a)调整细胞浓度至约107个/ml。
2、取1ml细胞悬液至试管中,加入适量CFSE工作液,轻轻搅拌混匀(建议CFSE的终浓度参考相关论文或做个预实验:分别设定终浓度为0.5,1,2,5,10,20 μM…,以确定最佳染色浓度b))。
3、在37℃培养箱中培养15-30分钟。
4、离心后去上清,加入2 ml PBS溶液,再离心后去上清,重复此操作一次。
5、加入合适的培养基制成细胞悬液。
6、取500 μl的细胞悬液加在培养孔中,用荧光显微镜观察,看到荧光后,根据自己实验的要求调整细胞数量c)进行实验。
例2 载玻片观察法
1、准备1 ml细胞悬液,用PBS(-)等合适的培养基a)调整细胞浓度至约107个/ml。
2、取30 μl细胞悬液至试管中,加入10 μl浓度为20 μM的CFSE工作液(终浓度为5 μM),轻轻搅拌混匀b)。
3、在37 oC培养箱中培养15-30分钟。
4、滴10 μl的细胞悬液在载玻片上,用荧光显微镜观察,看到荧光后,根据自己实验的要求调整细胞数量C)进行实验。
*如果背景高的话,第3步之后需要洗去多余的CFSE:
离心后去上清,加入90 μl PBS溶液,再离心后去上清,重复此操作一次。
a)尽可能用不含血清的培养基,血清中的酶和蛋白质会分解CFSE,可能会影响染色效果。
b)如果荧光强度弱,可以适当提高CFSE的终浓度。如果细胞毒性大或背景太高,可以适当降低CFSE的终浓度,请摸索条件找到最佳浓度。
c)根据不同的实验目的和要求,采用稀释的方法调整细胞数量。

 

实验操作:

 

如何进行细胞染色

详请参见操作说明集 <如何进行细胞染色>部分