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  • 别      名: PI/RNase Staining
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  • 储存条件: 0-5
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- Cell Cycle Assay Kit - PI/RNase Staining
货号: C543

细胞周期检测试剂盒
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50 tests460现货

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- Cell Cycle Assay Kit - PI/RNase Staining——细胞周期检测试剂盒(PI/RNase Staining)
概述:
DNA含量分析在流式细胞检测中,占有相当大的比例。通过这种方法,研究者可以进行抗癌药物的毒性评估,并对恶性肿瘤细胞的预后效果及进展程度进行分析。在细胞周期检测中,DNA含量也同样作为重要的分析手段而被广泛应用。通过细胞DNA含量的测定,可计算各细胞周期的百分率,也可通过DNA片段化检测、DNA双染标记等方法检测细胞凋亡。
Cell Cycle Assay Kit - PI/RNase Staining试剂盒,可快速完成细胞周期的分析,操作简便。本产品使用碘化丙啶(PI)作为DNA荧光染料,通过流式细胞术得到细胞周期中G0/G1,G2和S期细胞的比例。
试剂盒内含:
50 tests:
- PI Solution         1.25 ml
- RNase Solution    0.125 ml
- Assay Buffer        25 ml
 
储存条件:
0-5℃避光
 
所需的设备和材料:
- 流式细胞仪(碘化丙啶PI:λex=535 nm,λem=617 nm)
- 37℃培养箱
- PBS缓冲液
- 1.5 ml微量管
- 100-1000 μl、20-200 μl、2-20 μl移液器
 
溶液制备:
本产品在固定细胞及不细胞固定的情况下皆可使用。
配置Working solution (1 sample)
取500 μl Assay Buffer 后,分别加入25 μl PI Solution和2.5 μl RNase Solution。
*工作液易遇光分解,请在使用前立即配置并用铝箔纸包裹避光保存。
配置好的工作液1天内用完。

操作步骤:
非固定细胞
1、 将细胞密度调整为1~5×106 cells/mla)
。2、 取1 ml的细胞悬液加入到1.5 ml微管中,在1,000× g离心3min。b)
3、 弃上清液后加入1 ml PBS缓冲液清洗细胞,在1,000× g离心3min。
4、 弃上清液后加入0.5 ml Working Solution。
5、 在4℃避光培养30 min。
6、 涡旋振荡使细胞分散,在37℃避光培养30 min。
7、 涡旋振荡使细胞分散,用尼龙筛网过滤,以去除样品中的细胞团块c)
8、 用流式细胞仪检测。
a) 贴壁细胞用胰蛋白酶-EDTA消化细胞后,PBS洗涤并离心收集细胞。
b) 根据不同的细胞种类,需适当调整转速与离心时间。
c) 样品处理后,剩余部分无法继续保存并使用。
 
固定细胞
1. 将细胞密度调整为1~5×106 cells/mla)
2. 取1 ml的细胞悬液加入到1.5 ml微量管中,在1,000× g离心3min。
3. 弃除上清,并在细胞团中加入1ml的-20℃保存的70%乙醇。
4. 涡旋振荡使细胞分散,4℃下静置2 hb)
5. 离心3min、1,000 g后,去除乙醇c)
6. 加入1 ml PBS缓冲液清洗细胞,在1,000× g离心3min。
7. 弃上清液后加入0.5 ml Working Solution。
8. 涡旋振荡使细胞分散,37℃避光培养30 min。
9. 涡旋振荡使细胞分散,4℃避光培养30 min。
10. 涡旋振荡使细胞分散,使用尼龙筛网过滤,以去除样品中的细胞团块d)
11. 使用流式细胞仪检测。
a) 贴壁细胞用胰蛋白酶-EDTA消化细胞后,PBS洗涤并离心收集细胞。
b) 根据不同的细胞种类,需适当调整固定时间。
c) 根据不同的细胞种类,需适当调整转速与离心时间。
d) 样品处理后可以在4°C以下保存并继续使用,但是保存时间长短与细胞种类有关。