U.S.A | EUROPE | JAPAN
  • 分 子 式: C51H50Cl2N2O23
  • 分 子 量: 1129.85
  • 外      观: 红色粉末
  • 别      名: Fluo 3-AM
  • 纯      度: 85%以上(HPLC)
  • 储存条件: -20
  • 运输条件: 室温
搜索产品
您现在的位置:首页 > 产品中心 > 钙离子 > Fluo 3-AM
Fluo 3-AM
货号: F023/F026
1-[2-Amino-5-(2,7-dichloro-6-acetoxymethoxy-3-oxo-9-xanthenyl)phenoxy]-2-(2-amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N',N'-tetraacetic acid, tetra(acetoxymethyl)ester
CAS号: 121714-22-5
规格
价格
到货期
F023: 1 mg3180现货
F026: 50 μg×81940现货
F026: 50 μg350现货

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

Fluo 3-AM是一种检测细胞内钙离子的荧光探针。Fluo 3若以游离配体形式存在时几乎是非荧光性的,但是当它与钙离子Ca2+结合后荧光会增加6080倍,是目前最常用的一种钙离子荧光探针。激光共聚焦荧光显微镜具有氩激光器,所以Fluo 3可被广泛使用于这种显微镜上。这种荧光信号发出来的长波也便于减小对样品细胞的光损伤。Fluo 3也可用来检测紫外光照射下可裂解的螯合钙或其它形式的钙。Fluo 3-AMFluo 3的一种乙酰甲酯衍生物,通过培养,能够轻易进入细胞中。

Fluo 3-AM (钙离子荧光探针) 需用无水DMSO (anhydrous DMSO)配制。Fluo 3-AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。Fluo 3-AM进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fluo 3,从而被滞留在细胞内。Fluo 3可以和钙离子结合,结合钙离子后可以产生较强的荧光,最大激发波长为506nm,最大发射波长为526nm

 

50 μg Fluo 3-AM的配制

DMSOμl

10

20

30

40

44

50

浓度(mmol/l

4.4

2.2

1.5

1.1

1.0

0.9

 

操作说明(for Human T cells)*
试剂:
2 mM
Fluo 3-AM/DMSO
Pluronic F127
Hanks’ balanced salt solution (HBSS)
HEPES buffer saline (10 mM HEPES, 1 mM Na2HPO4, 137 mM NaCl, 5 mM KCl, 1 mM CaCl2, 0.5 mM MgCl2, 5 mM glucose, 0.1% BSA, pH 7.4)

 

操作:

1. 配制2mMFluo 3-AM/DMSO溶液即:将1mg Fluo 3-AM溶于442ulDMSO中(推荐现配现用)。
2. Pluronic F127先用DMSO配制成5%W/V)的溶液,室温保存。使用时加入到上述Fluo 3-AM/DMSO溶液至终浓度0.05%W/V.
    Pluronic F127可以防止Fluo 3-AMHBSS中聚合并能帮助其进入细胞。
3. HBSS稀释Fluo 3-AM溶液,制备4 µMFluo 3-AM working solution
4. Fluo 3-AM working solution加入细胞,在37 培养20分钟。
5. 加入5倍体积的含有1%胎牛血清的HBSS,再继续培养40分钟。
6. HEPES buffer saline洗涤细胞3次,然后用HEPES buffer saline使细胞重悬浮,制成1x105 cells/ml的溶液。
7. 37 下培养10 分钟,然后用该细胞进行荧光钙离子检测。
8.
观察528 nm (excitation: 490-500 nm)时的荧光。
*
标记的条件因细胞种类而异,在每次实验前,请先确定最佳条件。以上方法仅供参考。

 

 

 

染色实例:

加载了Fluo 3的新鲜分离的大鼠肝脏细胞PE刺激后出现规则胞浆钙振荡。上图为细胞明场图和不同时间点(min)的比例成像,下图为影响Fluo 3荧光强度随时间的变化。成像系统:Photon Technology International Inc.,显微镜Nikon TE2000UCCD相机QuantEM512S,软件ERP

(北京师范大学细胞生物学研究所 崔宗杰教授 提供照片)

 

如何测定细胞内钙离子

详情参见操作说明集<如何用荧光法测定细胞内钙>部分