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  • 分 子 式: C44H47N3O24
  • 分 子 量: 1001.85
  • 外      观: 黄色或橙黄色粉末
  • 别      名: Fura 2-AM
  • 纯      度: 98%以上(HPLC)
  • 储存条件: -20
  • 运输条件: 室温
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Fura 2-AM
货号: F015/F025
1-[6-Amino-2-(5-carboxy-2-oxazolyl)-5-benzofuranyloxy]-2-(2-amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N',N'-tetraacetic acid, pentaacetoxymethyl ester
CAS号: 108964-32-5
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F015: 1 mg2210现货
F025: 50 μg×81360现货
F025: 50 μg264现货

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Fura 2是最常用的检测细胞内钙离子浓度的荧光探针之一,Fura 2-AM(钙离子荧光探针)需用无水DMSO(anhydrous DMSO)溶解。

Fura 2Quin 2的荧光特性做了改进。1 μM Fura 2结合后的信号强度相当于30 μMQuin 2结合后的信号强度。这样就保证在实验中可以使用比Quin 2的浓度低得多的Fura 2指示剂。Fura 2是一种使用最广泛的比率测量的钙荧光指示剂。目前适用于Fura 2实验的设备有很多,它特别适合于用数字成像显微镜来检测。它比Indo 1更不易受到光褪色作用的影响。细胞形状的改变有时候会影响340 nm380 nm的荧光比率,比如,平滑肌收缩会同时引起这些波长的荧光信号强度的减小。另外,对于血管来说,340 nm的信号强度的增加会因为血管收缩而趋向于变小,而380 nm信号强度的减小会因为血管收缩而变大。Fura 2-AMFura 2的一种乙酰甲酯衍生物,通过培养,能够轻易地负载到细胞中。

Fura 2可以和钙离子(Ca2+)结合,结合钙离子后在330-350 nm激发光下可以产生较强的荧光,而在380 nm激发光下则会导致荧光减弱。这样就可以使用340 nm380 nm这两个荧光的比值来检测细胞内的钙离子浓度,可以消除不同细胞样品间荧光探针装载效率的差异,荧光探针的渗漏,细胞厚度差异等一些误差因素。

Fura 2-AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。Fura 2-AM的荧光比较弱,最大激发波长为369 nm,最大发射波长为478 nm,并且其荧光不会随钙离子浓度改变而改变。Fura 2-AM进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fura 2,从而被滞留在细胞内。Fura 2和钙离子结合后,最大激发波长为335 nm(最大激发波长随离子浓度的的不同而有所不同),最大发射波长为505nm。实际检测时推荐使用的激发波长为340nm,发射波长为510 nm。如果做双波长检测,则推荐使用的激发波长为340 nm380 nm

 

 

 

 

 

 

 

 

 

操作说明 (for NG 108-15/ Neuronal Cell Line)*
试剂:
1 mM
Fura 2-AM/DMSO (1 mg Fura 2-AM 溶于 1 ml DMSO)
Hanks'balanced salt solution (HBSS)
HEPES buffer saline (20 mM HEPES, 115 mM NaCl, 5.4 mM KCl, 1.8 mM CaCl2, 0.8 mM MgCl2, 13.8 mM glucose, pH 7.4)

 

操作:
1.
用含有5%的胎牛血清的DMEM在玻璃底培养皿中培养细胞。
2.
将培养液换成1 mM dibutyl cAMP/DMEM,再培养细胞3-4天来诱导树突。
3.
HEPES buffer saline来稀释1 mM Fura 2-AM DMSO溶液,制成1μMFura 2-AM   working

solution
4.
除去培养液,加入0.5 ml Fura 2-AM working solution
5.
培养20分钟,然后除去Fura 2-AM working solution
6.
HEPES buffer saline洗涤细胞一次,然后将细胞在HEPES buffer saline中培养1小时。
7.
将此细胞用于荧光钙离子检测。
8.
激发波长380 nm(游离钙)和340 nm(结合钙),发射波长510nm
*
标记的条件因细胞种类而异,在每次实验前,请先确定最佳条件。以上方法仅供参考。

 
染色实例1:

视网膜双极细胞钙离子浓度定标测定

A)分离的视网膜双极细胞预孵育2 ug/ml Fura-2 AM 20分钟,且存在有ionomycin时,分别在无钙、10 mM游离钙离子以及用无钙液洗脱的溶液中的图像;(B)双极细胞不同区域(13)的胞内钙离子浓度变化的连续记录图。10 mM游离钙离子溶液可使双极细胞胞体和轴突终末钙离子浓度显著升高,并可部分洗脱。

图像处理软件SimplePCI6CCD Hamamatsu ORCA-ER,显微镜Olympus倒置显微镜IX7040倍油镜。
(复旦大学神经生物学研究所  杨雄里院士 提供照片)

 

染色实例2:
 
加载了Fura 2的新鲜分离的大鼠肝脏细胞PE刺激后出现规则胞浆钙振荡,上图为细胞明场图和不同时间点(min)的比例成像(F340/F380),下图为影响Fura 2荧光强度的比例(F340/F380)随时间的变化。成像系统:Photon Technology International Inc.,显微镜Nikon TE2000U,CCD相机QuantEM512S,软件ERP。
(北京师范大学细胞生物学研究所 崔宗杰教授提供照片)
 
染色实例3:
左图(Control)为施加高钾(50 mM)前,急性分离的大鼠背根神经节(DRG)细胞胞内钙离子浓度较低,施加50 mM KCl 5s后,DRG细胞内钙离子浓度快速升高(右图)
(上海大学 吉永华教授 提供照片)