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Glutamine Assay Kit-WST
货号: G268

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1 set6060期货

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 谷氨酰胺是 TCA 循环的中间体α-酮戊二酸的主要来源,并且是用于核酸和其他氨基酸合成及能量产生的重要物质。根据文献报 道 1)特别是在癌细胞中,谷氨酰胺作为底物可促进 Glutaminolysis 的生成,而 Glutaminolysis 是产生 α-酮戊二酸的途径之一。同时 Glutaminolysis 还可以消除活性氧并减少氧化型谷胱甘肽。
Glutamine Assay Kit-WST 是用于定量检测谷氨酰胺的试剂盒。 无论是培养基内还是细胞内的谷氨酰胺均可以通过 WST 的还 原反应进行定量,可检测的最低浓度为 5 μmol/l。此外,本试剂盒还可使用 96孔板进行多样品批量检测
 产品信息
 
Dye Mixture ×1 Glutamine Standard (红盖子) ×1
Enzyme (绿盖子) ×1 Glutaminase (黄盖子) 20 μl ×1
Reconstitution Buffer (白盖子) 750 μl ×1
Reaction Buffer 5 ml ×1
Assay Buffer 7.5 ml ×1
Lysis Buffer 25 ml ×1
Filtration Tube ×12 
※本试剂盒附带的FiltrationTube用于细胞内谷氨酰胺的定量 检测。
本试剂盒可检测 8 个标准样品和 12 个检测样品(n = 3 时)。
因此附带了 12 个 Filtration Tube。
当需要 12 个以上 检测样品时,需另外准备 FiltrationTube(Nanosep 超滤离心 管(10K)([OD010C33],PALL公司))。 
所需设备和材料 
-酶标仪(450 nm 滤光片)      -96 孔板 -培养箱 (37℃)      
-多通道移液器 (20-200 μl)   -锥形样品管      
-单通道移液器 (100-1000 μl, 20-200 μl, 2-20 μl)
-Phosphate buffered saline (PBS) 
注意事项
・本试剂盒中的试剂,请恢复至室温再使用。
・由于在运输过程中可能会因振动而使试剂粘附在管壁或管盖内侧,因此在打开前,请将试剂敲落至管底部。
・由于 Glutaminase悬浊液的状态。静置后会发生沉淀,因此在使用前请先用移液器吹打混匀。
・为了获得准确的实验结果,建议对每个检测样本使用复(n=3 或更多)孔。
・向样品中添加 Working solution后立即开始显色。请使用多通道移液器以减少由于每个孔之间的时间差而导致的检测误差。
・样品需要稀释到标准曲线范围内再进行检测。 ・由于本试剂盒含有玻璃容器和铝制密封盖,使用时请戴防护手套。
・本产品用于检测细胞培养上清液和细胞内的谷氨酰胺。测量细胞内谷氨酰胺浓度时,
请使用试剂盒附带的 Lysis Buffer 制备 细胞裂解液和 Glutamine standard solution。细胞裂解液请在使用 Filtration Tube 进行除蛋白质处理之后再加入。 
配制溶液
Dye Mixture stock solution的制备 将所有 Reconstitution Buffer 加入到 Dye Mixture的 Vial瓶中溶解。
*将溶解好的 Dye Mixture stock solution 转移到 Reconstitution Buffer瓶中,遮光,冷藏(0-5℃)保存。(保质期 2 个月) Enzyme stock solution 的制备 向 Enzyme 中加入 120 μl PBS,用移液器吹打混匀。
*Enzyme 可能会从管底部脱落并粘在管壁或盖子内侧。请确认将 Enzyme敲落至管底后再打开。
*Enzyme stock solution 应在冰浴上使用,溶解后需要冷藏(0-5℃)保存(保质期 2 个月)。 Glutamine standard stock solution的制备(10 mmol/l) 向 Glutamine standard 中加入 300 μl 超纯水,用移液器吹打混匀。
*Glutamine standard 可能会从管底部脱落并粘在管壁或盖子内侧。请确认将 Glutamine standard 敲落至管底后再打开。
*Glutamine standard stock solution 应在冰浴上使用,溶解后应冷藏(0-5℃)保存(保质期 2个月)。 Glutaminase solution 的制备 用 Reaction Buffer 稀释 Glutaminase。
*请参考表 1 配制 Glutaminase solution。 
                                     24 孔板     48 孔板     96 孔板
Reaction Buffer               550 μl      1100 μl     2200 μl
Glutaminase                   2.5 μl         5 μl        10 μl