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HilyMax
货号: H357

阳离子脂质体转染试剂
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1 ml1570现货

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应用:基因转染                                      
特点: 

1.    实验操作简单
2.    可用于贴壁细胞和悬浮细胞的瞬转及稳转。
3.    适用于含血清的的培养基,毒性低,转染效率高且稳定。
4.    适用于SiRNA的转染实验。
5.    与同类进口产品相比,价格较低。

 

订购前请来电咨询各细胞系的相关条件优化

 

各细胞系GFP转染实例

 

基本操作:转染步骤(24孔板)a)

1.细胞准备

贴壁细胞:转染前一天,调整细胞浓度在0.5 ml的培养基中预先接种40%-90%的汇合细胞b,转染前将细胞悬液接种至24孔板。

悬浮细胞:转染前一天,调整细胞浓度至每0.5 ml的培养基中0.1-1.6×106的细胞,细胞悬液接种至24孔板。

 

2.形成DNA-HilyMax转染复合物c

添加不含血清的培养基至消毒离心管。d)

添加质粒DNA0.5-15μg)至离心管,使用移液器充分混合。

添加HilyMax至离心管,使用移液器充分混合,推荐的DNAμg)与HilyMax的使用比率为1:2-1:6

在室温下培养15分钟 e)

 

3.添加转染复合物至细胞:在步骤1准备好的培养板上,每孔中添加DNA-HilyMax转染复合物。

 

4.培养:在37下放置于CO2培养箱培养。f)

 

5.检测:确保转染后2472小时,基因的活性

a)实验用量需要根据培养板大小而改变,请参考说明书不同培养板转染状况部分。

b)培养基中血清成分不会影响转染效果。

c)DNAHilyMax的参考密度见表1

d)培养基中的血清及抗生素会影响DNA-HilyMax转染复合物的形成。Opti-MEM, DMEMMEM不会影响转染效果,请使用其他培养基来检验转染效率。

e)培养时间超过30分钟会造成转染效率偏低。

f)转染后更换培养基可以有效地提高转染效率,降低某些细胞系的毒性。

 

转染复合物中DNAHilyMax的使用量:

1:表明了不同细胞密度下推荐的DNAHilyMax量。如果转染效率较低,请适当提高HilyMax的量;

如果毒性过高,请适当降低HilyMax的使用量。

 

2:表明了不同大小培养板的系数。这些系数是在24孔板下计算得出的,表1DNAHilyMax的数据可以乘上这些系数。

  

 

不同培养板转染状况:

3不同培养板适合的培养基、DNA的使用量以及DNAHilyMax混合比率列。 

 

NIH3T3, HEK293, CHO, HeLaCOS-7推荐转染条件:

NIH3T3, HEK293, CHO, HeLaCOS-724孔板培养的最适转染条件显示在表4中,每种细胞系DNAHilyMax溶液最适量及其密度以及转染实验的基本操作。

若使用其他培养板请参考表3

 

转染后培养基的更换:

转染后更换培养基可以有效地提高NIH3T3, HEK293, CHO, HeLaCOS-7的转染效率(请见表图)。

这五种细胞系转染后24小时更换培养基可以获得更高的转染率。

 

4:五种细胞的实例

 

 24孔板上转染发生于80%汇合细胞中, DNA HilyMax 分别为 1μg3-7μl。转染18小时后,更换新的培养基

 

 
有详细操作方案的细胞种类:(欢迎来电或邮箱索取各细胞系操作优化条件)
A549 Cell HepG2 Cell MDCK Cell Caco2 Cell K562 Cell
Neuro2a Cell Vero Cell CHO Cell L6 Cell NIH3T3 Cell 
HEK293 Cell LNCap Cell PC3 Cell  HeLa Cell MCF7 Cell PC12 Cell
   
使用HilyMax及I社产品转染率对比
 
使用HilyMax及R社产品Luciferase表达比较
   
 

 

细胞系:用于HEK293NIH3T3CHOHeLaCOS-7转染效果较好,具体请参考下列图表
DNA:用于纯化质粒DNAA280/A260=1.7-1.9)推荐转染的DNA浓度为0.15-1.0 mg/ml。转染中DNA的最佳使用量取决于细胞的类型及细胞密度。
HilyMax:转染时HilyMax的最佳使用量取决于细胞的类型及细胞密度。若HilyMax使用量过低会致使转染效率低,而使用量过高则会产生较强的毒性,请在第一次实验时把DNAμg)与HilyMax的使用比率控制在1:1-1:6之间。
细胞密度:推荐的转染细胞密度为40%-90%的汇合细胞,最佳细胞密度取决于细胞类型。
转染后培养基的更换:在转染后更换培养基可以提高转染效率,还可降低一些细胞系的毒性。推荐转染24小时后更换培养基

HilyMax的使用准备:
添加1.0 ml Lipoform缓冲液于HilyMax试剂中,使用涡旋器振荡混合30秒。请检查HilyMax试剂是否完全溶解,如果溶液中仍有部分不溶残留物,需继续振荡或使用移液器充分混匀,直到完全溶解。
提醒:转染效率与细胞种类、细胞浓度以及DNAHilyMax的混合比例等情况有关,请参照以下优化条件操作。

储存注意事项:
试剂盒保存在0-5
添加过Lipoform缓冲液的HilyMax溶液在-20下可以储存6个月。
若经常使用, HilyMax溶液可放置于在0-5下, 请在1-2个月内用完。
解冻开启过的HilyMax溶液,需使用涡旋器和移液器使其充分混匀。
HilyMax
溶液在反复冷冻和解冻后会有小部分出现不溶,但这并不会影响转染效果。

1.Hilymax工作液准备过程中Hilymax试剂是否充分溶解?

若溶液中仍含有不溶部分,继续使用涡旋器或移液器使其完全溶解,不溶性成分的存在会降低转染效率。

2.DNA-Hilymax转染复合物培养是否超过30分钟?

超过30分钟的培养会造成过低的转染率。

3.DNA和Hilymax的量是否为最优比率?

DNAHilymax的量的比率会较大影响转染效率,请参考表1优化转染。某些条件下,增大DNAHIlymax的使用量会提高转染效率,如果转染效率仍很低,那么优化后请改变DNA(ug)Hilymax(ul)比率至17-19或把DNA量提高到1.5-2倍。若毒性过强,请降低HilymaxDNA-Hilymax转染复合物中的比率。