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IgG Purification Kit-G
货号: AP02

IgG纯化试剂盒-G
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1 set2600期货

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特点:整个过程在1支过滤管中进行                             

            抗体回收率在70%-90%                    
            
血清中的IgG纯度超过80%                                
            30
分钟内即可获得纯化后的IgG         
            
重现性高且没有亲和损失

 

IgG纯化试剂盒用于分离和纯化山羊、小鼠、兔及其他动物的免疫球蛋白G。该试剂盒包含固定的蛋白质AG以及用于回收IgG的缓冲液。从血清或其他含有IgG的溶液中分离和纯化IgG的总时间约为30分钟。由于蛋白质AG的支持物为硅胶,离心后凝胶上的残留溶液的体积非常小。因此,可用两次洗涤去除所有不与蛋白质A结合的蛋白质或其他物质。此外,洗脱过程中IgG的变性是最少的,因为结合到凝胶上的IgG的释放过程是非常快速的。此试剂盒中的凝胶可重复利用10次或更多次而效能不变。用过的凝胶在0-5的洗涤缓冲液中仍可稳定存放一年。

试剂盒内含
Protein G Cartridge tube……………… 1 
           Washing buffer……………13 ml × 1
Elution buffer………………1.8 ml × 1
          Catching buffer……………  1 ml × 1        

1.5 ml Microtube……………5  × 2  

 

注意
IgG溶液含有明胶,在使用试剂盒之前可能需要先用酶消化。


所需设备及材料
离心机,100-200 μl移液器,voltex混合器,0.5 ml微试管

 

IgG分离的一般操作方案
1. 
IgG50 μl Washing buffer混合,制成50 μl样品溶液。
2. 
将步骤1所制得的混合溶液加入到Protein A Pack所包含的筒式试管的小杯中,不要关闭管盖。
3. 
用手指将杯旋转几次,以混合凝胶a)。把管放在室温下静置2分钟。
4. 
盖上杯盖,以最大速度离心30秒。
5. 
将滤出液再加入杯中,并重复步骤34 b)。将滤出液转移到0.5 ml管中,并在0-5存放c)
6. 
向杯中加入200 μl Washing buffer。不要关闭管盖。用手指将杯旋转几次,以混合凝胶a)
7. 
盖上杯盖,以最大速度离心30秒。丢弃储蓄池的滤出液。
8. 
重复步骤67
9. 
Protein A Pack中的1.5 ml管中加入60 μl Catching buffer。将杯转移到此管中d)
10. 
向杯中加入70 μl Elution buffer。不要关闭管盖。用手指将杯旋转几次,以混合凝胶a)
11. 
盖上杯盖并以最大速度离心30秒。
12. 
重复步骤1011
13. 
取出杯e)。盖上杯盖并用voltex混合。将溶液储存在0-5f)

 

a) 倾斜筒式试管并用手指使杯旋转10-20次。
b)
通过此步骤,IgG的回收率可以提高25-30%以上。可重复此步骤以得到最大的IgG回收率。
c)
如果IgG的回收率低,则使用此滤出液再次回收IgG。从步骤2开始按照操作说明进行实验。
d)
不要丢弃储蓄池。在步骤13中将用到它。
e)
将该杯放回步骤9中保留的储蓄池中。按照步骤67用洗涤缓冲液洗涤凝胶。加入200 μl洗涤缓冲液并使蛋白质A凝胶筒式试管保持在0-5中。离心该试管并在使用前去除洗涤缓冲液。
f)
可加入等量丙三醇,并储存于-20中。

 

1.此试剂盒的IgG回收率为多少?

这取决于IgG的类型和动物的类型。在蛋白质A或蛋白质G的高亲和类型IgG的情况中,从100-200 μg IgG或含有其他蛋白质或大分子的IgG溶液中可回收约70-80%的IgG。

2.此试剂盒中使用的纯化IgG的纯度如何?

仅用一次纯化过程即可得到高度纯化IgG。

3.从血清中可回收多少IgG?

从50 μl血清中可回收到约150-350 μg的IgG。

4.蛋白质A凝胶可使用多少次?

至少20次。如需要额外缓冲液,有缓冲液配方提供。

5.可否将用过的蛋白质A凝胶或蛋白质G凝胶用于纯化不同的IgG溶液?

对于不同的样品,请使用新的凝胶,以避免污染。

6.用过的蛋白质A凝胶或蛋白质G凝胶是否稳定?

用过的蛋白质A凝胶或蛋白质G凝胶在0-5℃的洗涤缓冲液中可稳定存放一年。