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Mitophagy Detection Kit
货号: MD01

线粒体自噬检测试剂盒
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1 set3950现货

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  • 参考文献
 
 线粒体(mitochondria)是细胞内制造能量的场所,在细胞器中扮演着重要的角色。近年有报告指出,去极化线粒体的积累引起的阿尔茨海默病(Alzheimer‘s disease)与帕金森病(Parkinson’s disease),可能与线粒体自噬有关。通过线粒体自噬(mitophagy)系统,将氧化应激、DNA损伤因素导致的去极化线粒体,隔离包裹成自噬体(autophagosome)后、再与溶酶体(lysosome)融合后降解。
本试剂盒包括“线粒体自噬体染料(Mtphagy Dye)和溶酶体染料(Lyso Dye)。MtphagyDye通过化学键结合在细胞内的线粒体上,保持较弱的荧光。通过诱导线粒体自噬,线粒体自噬体会与溶酶体融合,Mtphagy Dye的荧光强度会增大。通过本试剂盒包含的Lyso Dye,单独标记溶酶体,来确认这一融合过程。

〇Mitophagy Induction and Detection of Mitochondrial Membrane Potential Changes
Mitochondrial condition in the carbonyl cyanide m-chlorophenyl hydrazine (CCCP)treated Parkin-expressing HeLa cells was compared with untreated cells using Mitophagy Detection Kit (MD01) and JC-1 MitoMP Detection Kit (MT09).
 
〇 Result
Mitophagy was not detected in untreated cells and the membrane potential was normal. However, reduction of membrane potential and mitophagy were observed in treated cells.
 
 
〇Detecting Condition
Mitophagy Detection]
Ex: 561 nm, Em: 570-700 nm

[Mitochondrial Membrane Potential Detection]
Green Ex: 488 nm, Em: 500-550 nm
Red Ex: 561 nm, Em: 560-610 nm

 〇Experimental Condition
Transfection of Parkin plasmid to HeLa cells
HileyMax (H357) was used to transfect Parkin plasmid to HeLa cells (Parkin plasmid/HilyMax reagent: 0.1μg/0.2 μL) by incubating overnight.

Detection of Mitophagy
1. Add 0.1 μmol/L Mtphagy working solution to Parkin expressing HeLa cells and incubated for 30 minutes at 37 ℃
2. Wash cells with HBSS
3. Add 10 μg/mL CCCP/MEM solution and inclubate for 2 hours at 37 ℃
4. Observe under fluorescence microscope

Detection of Mitochondrial Membrane Potential
1. Add 10 μg/mL CCCP/MEM solution to Parkin expressing HeLa cells and incubate for 1.5 hours at 37 ℃
2. Add 4 μmol/L JC-1 working solution (final concentration: 2 μmol/L) and incubate for 30 minutes at 37 ℃
3. Wash with HBSS and add Imaging Buffer Solution.
4. Observe under fluorescence microscope

 参考文献:

 ○以下是试剂盒的检测原理和实验例的参考文献

https://pubs.acs.org.ccindex.cn/doi/10.1021/acschembio.7b00647

 以下是流式仪检测线粒体自噬的参考文献

https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2213231717300423

 
Q:对比原有方法有什么优势?

A与使用pH敏感mt-Keima蛋白法比,本试剂盒使用小分子光探,不需要光蛋白。

与一般活胞成像的光探染色察即可。

Q:Mtphagy Dye和Lyso Dye的储存液可以保存多久?

AMtphagy DyeLyso Dye存液在-20可以定保存1个月。建按照用量分装保存

Q:Mtphagy Dye和Lyso Dye的工作液可以保存多久?

A

Q:培养基中的酚红影响检测吗?

A:如果是使用共聚焦几乎没有影响,如果使用落射镜观察背景会高

(参考如下片)。

因此使用落射镜时Working solution染色要使用不含酚的培养基或HBSS

片翻:落射、共聚焦

                                         落射                                                         共聚焦

Q:荧光显微镜的推荐波长是什么?

A:各试剂推荐波如下。

 Mtphagy Dye  Ex500560 nmEm670730 nm

 Lyso Dye         Ex350450 nmEm500560 nm

中的「激/射光」和「检测例」参考如下