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R-Phycoerythrin Labeling Kit-NH2
货号: LK23

R-藻红蛋白标记蛋白质或氨基化合物-氨基
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3 samples3760现货

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特点:整个标记过程仅需3个小时

            整个标记过程在1支过滤管中进行

            荧光标记抗体回收率高  

            适用于50-200 μgIgG          

 

藻胆蛋白是一种从蓝藻和真核藻类中得到的荧光蛋白,它的荧光强度要比化学荧光探针,如荧光素和罗丹明高得多。因此,用藻胆蛋白标记的抗体和其他分子在做流式细胞术和免疫染色时具有很高的灵敏度。R-藻红蛋白(R-PE)是一种藻胆蛋白,它在578 nm附近有红色荧光,激发波长为488 nmR-Phycoerythrin Labeling Kit-NH2能够简便快速地制备被R-PE标记的IgGNH2-reactive R-PE(该试剂盒的成分之一)具有一个活性的酯基团,不需任何活化能够轻易地与靶分子中的氨基形成共价键。试剂盒中的Filtration tube用来快速交换缓冲液和浓缩样品IgG溶液。该试剂盒中包含了包括标记产物的储存液等用于R-PE标记的所需的全部试剂。

*R-PE: R-Phycoerythrin(R-藻红蛋白)

试剂盒内含

3 samples
NH2-reactive R-PE…………350 μg × 3
          WS buffer…………4 ml × 1
Reaction buffer……………200 μl × 1
            Filtration tube………3

 

注意事项:
 
用该试剂盒标记的蛋白质的分子量应当>50,000
 
在标记过程中,IgG或者R-Phycoerythrin-IgG标记物始终在Filtration tube的滤膜上。
 
如果IgG溶液中含有分子量>10,000的其他蛋白质,如BSA或明胶时,在使用该试剂盒标记前,先要纯化IgG 溶液。IgG溶液能够用IgG Purification Kits(不包含于本试剂盒中)来纯化。
 
如果IgG溶液含有小的不溶物,离心后取上清液来进行标记。

 

标记IgG操作概述
1)将100 μl WS buffer以及含有100 μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。a
28,000-10,000 g离心10分钟后,加入100 μl Washing buffer再离心一次。b
3)完成离心后,将10 μl Reaction buffer加入到NH2-reactive R-PE中并用移液枪吹打使其溶解。
4)将含有NH2-reactive R-PE的溶液转移到IgG所集中的过滤管的滤膜上。
5)用移液器吸取溶液吹洗净整个滤膜表面,然后将过滤管放入培养箱中,37培养2小时。
6)将190 μl WS buffer加入到过滤管中并用移液器吹打1015次来回收标记产物。c 将溶液转移至0.5 ml的试管中,并储存于0-5下。d

 

a)样品溶液的体积不应超过100 μl。如果抗体浓度低于0.5 mg/ml,重复步骤12直至总的IgG聚积量达到100 μg
b
)如果溶液在离心后仍然残留在膜上,可以再离心5分钟或者适当增加转速。
c
)标记后产物的浓度为1.4-1.8 mg/ml。在进行后续的酶免疫,免疫印迹,免疫转染试验前先要将标记后的IgG稀释至适当的浓度。每个IgG分子上会被标记上1-2R-PE分子。没有被结合的R-PE可能会干扰正常的免疫试验。如果需要纯化的话,可以使用凝胶渗透柱或亲合柱。
d
)通常R-PE标记后的IgGStorage buffer中,0-5下至少能够保存2个月,如果需要保存更久,可以添加等量的丙三醇(终浓度:50%),并在-20下存放。但是,还要注意样品自身是否稳定。

 

1.能够用这个试剂盒标记其他蛋白质吗?

可以。只要标记分子的分子量>50,000且具有活性伯胺或仲胺结构。参照IgG的标记操作说明,可以标记0.5-1 nmol的蛋白样品。

2.能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗?

不行。寡核苷酸或者寡肽可能因为分子量太小而不能存在于滤膜上。

3.每个IgG能够标记多少个R-PE分子?

每个IgG平均能标记上1-2个R-PE分子。

4.标记反应过程中,NH2-reactive R-PE是否会形成一些低聚物?

不会。由于NH2-reactive R-PE中的所有氨基都被阻断,因此不会有低聚物生成。

5.是否必须要使用试剂盒所包含的WS Buffer?

是的,用WS Buffer来制备标记产物的储存液。但是,可以选择任何适合于该实验的缓冲液来稀释储存液。

6.标记产物能保存多久?

在4℃下能够保存2个月。如果需要保存更久,可以添加等量的丙三醇(终浓度:50%),并在-20℃下存放。但是,还要注意样品自身是否稳定。

7.在与IgG反应后,未标记的NH2-reactive R-PE是否仍含有活性酯基?

没有。反应过程中,活性酯基完全被水解了。