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  • 分 子 式:
  • 分 子 量: 849.19
  • 外      观: 棕色或绿褐色的固体
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  • 纯      度: ≧ 90.0 %
  • 储存条件: 0-5
  • 运输条件: 室温
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-SulfoBiotics- HSip-1
货号: SB21
Copper(2+), [N-(3',6'-Dihydroxy-3-oxospiro[isobenzofuran-1(3H),9'-[9H]xanthen]-5-yl)-1,4,7,10-tetraazacyclododecane-1-acetamide-κN1,κN4,κN7,κN10]-Coordination Compound
硫化氢检测试剂
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1 mg2130现货

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硫化氢 (H2S) 在舒张血管,保护细胞和调节胰岛素分泌方面具有重要的生理作用已经得到广泛的认可。H2S被认为是一种类似于NO和CO的气体信号分子,但在生理条件下大约80%的H2S是以HS-的状态存在的(pKa=7)。HS-很容易转变为各种过硫化物和多硫化物。 -SulfoBiotics- HSip-1 是一种新的特异性检测H2S的荧光探针,当和H2S反应时会发出较强的绿色荧光。 -SulfoBiotics- HSip-1 DA可以穿透细胞膜检测细胞内的H2S。
图1.  HSip-1 和 HSip-1 DA的化学结构    图2. HSip-1和H2S反应的激发、发射光谱图
 
储存条件:
- HSip-1  在冷暗处保存。
 
所需的设备和材料:
- Dimethyl Sulfoxide (DMSO)  -无血清培养基
- HBSS      -PBS
- 移液器
 
 
 
溶液制备:
制备10 mmol/l HSip-1储存液
加117 μl超纯水至含有1 mg HSip-1的管子中,用移液器吹打溶解。
*配制好的溶液请在-20℃保存,可以保存1个月。
制备1 mmol/l HSip-1 DA储存液
加53 μl DMSO至含有50 μg HSip-1 DA的管子中,用移液器吹打溶解。
*配制好的溶液请在-20℃保存,可以保存1个月。
 
实验例:
1、 用HSip-1检测硫化氢
1) 用PBS稀释10 mmol/l HSip-1储存液,制成200 μmol/l的 HSip-1工作液。
2) 用1 ml 充氮处理过的超纯水溶解7.8 mg Na2S制成 100 mmol/l Na2S溶液。
3) 吸取20 μl 100 mmol/l 的Na2S溶液至980 μl超纯水中,制成2 mmol/l 的Na2S溶液。
4) 吸取100 μl 2 mmol/l 的Na2S溶液至900 μl超纯水中,制成200 μmol/l 的Na2S溶液。
5) 用超纯水稀释200 μmol/l 的Na2S溶液,制成一个系列浓度的(200 μmol/l,100 μmol/l,
50 μmol/l,25 μmol/l,12.5 μmol/l,6.3 μmol/l,3.2 μmol/l,0 μmol/l)的Na2S标准溶液。
6) 吸取350 μl 200 μmol/l的 HSip-1工作液至300 μl的Na2S溶液中,并用涡旋振荡器振荡混匀。
7) 上述溶液在室温培养30 min后,转移至96孔板中(200 μl/孔)。
8) 用荧光酶标仪测定在516 nm(λex=491 nm)的荧光强度。
                                图3.不同浓度硫化氢-荧光强度变化图
 
 
 
 
2、用HSip-1检测硫化氢
1. 在96孔板中接种1×106 cells/well 的HeLa细胞。
2. 在CO2培养箱中过夜培养。
3. 用PBS Buffer洗涤细胞后,去除上清液。
4. 加入100 μl Lysis Buffer*后,反复吹打溶解细胞。
5. 加入100 μl HSip-1 Working Solution后,在室温培养30 min。
6. 用酶标仪检测516 nm的荧光强度(Ex: 491 nm)。
 
*Lysis Buffer组成:6 mol/l Urea, 2% SDS, 150 mmol/l Tris-HCl (pH 7.4)
*在检测上述样品的同时,制作使用硫化氢供体Na2S产生的硫化氢的标准曲线。
 
 
 
结果
对比样品荧光强度与硫化氢标准曲线,计算样品中的硫化氢浓度,测得HeLa细胞中的硫化氢浓度为3-9 μmol/l。

 
*本产品是在东京大学大学院 药学系研究科 长野哲雄博士和花冈健二郎博士的指导下开发成功的。
 
参考文献:1) K. Sasakura, K. Hanaoka, N. Shibuya, Y. Mikami, Y. Kimura, T. Komatsu, T. Ueno, T. Terai, H. Kimura, and T. Nagano, “Development of a Highly Selective Fluorescence Probe for Hydrogen Sulfide”, J. Am. Chem. Soc., 2011, 133, 18003.