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New Trinder’s Reagents

应用:过氧化氢检测,比色法

特点:高水溶性

            稳定的苯胺类似物

            生色过程和氧化反应的pH范围很广

 

新型Trinder’s试剂是高水溶性苯胺衍生物,被广泛用于诊断检测和生化试验。在比色法测定过氧化氢活性中比常规生色的试剂具有若干优势。新型Trinder’s试剂足够稳定,既可以用于溶液也可以用于试验流水线检测系统中。在过氧化氢和过氧化物酶的存在下,新型Trinder’s试剂在与4-氨基安替比林(4-AA)或3-甲基苯并噻唑砜腙(MBTH)的氧化偶合反应过程中,形成非常稳定的紫色或蓝色染料。与MBTH偶合染料的摩尔吸光度比与4-AA偶合染料的高1.5-2倍;然而,4-AA溶液比MBTH溶液更稳定。底物被其氧化酶酶促氧化产生过氧化氢。该过氧化氢的浓度对应于底物浓度。因此,可通过氧化偶合反应的显色测定底物的量。葡萄糖、酒精、酰基-辅酶A和胆固醇可以用于检测与新型Trinder’s试剂及4-AA偶合的那些底物。现有10种新型Trinder’s试剂。下表显示每种用4-AA氧化的新型Trinder’s试剂复合物的最大波长和摩尔吸光度。在新型Trinder’s试剂中,TOOS是最常用的。然而,对于特定的底物,试验不同种类的新型Trinder’s试剂对开发最佳的检测系统是必需的。

 

新型Trinder’s试剂染料的特征描述:

 

 

 

 

 

检测溶液的制备——TOOS

1.      10 ml PBS溶解20 mg TOOS以制备6.6 mM TOOS溶液。

2.      10 ml PBS溶解14 mg 4-氨基安替比林(4-AA)以制备6.6 mM 4-AA溶液。

3.      PBS制备2 U/ml辣根过氧化物酶溶液。

4.      将等体积的各溶液混合以制备检测溶液。4下避光储存检测溶液。

 

检测步骤

1.      为酶促氧化反应制备样品溶液。缓冲液的pH值范围应为5.5-9.5

2.      使用相同缓冲液制备含有已知量的底物的标准溶液。

3.      向样品溶液中加入合适单位的氧化酶,接着加入等体积的检测溶液。

4.      室温或37下孵育该混合物30分钟到1小时。

5.      测定555 nm处的O.D.值。

6.      制备标准曲线,并测定样品溶液中的底物浓度。

 

◎ 过氧化物酶
◎ 过氧化氢
◎ 底物