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目前已开发出多种四唑盐用于测定脱氢酶活性。四唑盐是浅黄色的独特化合物,当被还原时会产生黄色到紫色的甲臜染料。由于其极低的水溶性,硝基蓝四唑盐(NTB或硝基TB)已被广泛用于在琼脂糖凝胶上检测脱氢酶。此外,四唑盐还被应用于多种定量检测中,诸如血液葡萄糖监控、乳酸根脱氢酶检测和葡糖-6-磷酸脱氢酶检测等。然而,这些四唑盐的溶解度很低,因此需要用去垢剂或有机溶剂溶解其甲臜染料。

 

Dojindo已开发出多种水溶性四唑盐(WST®),可用于细胞活性检测、脱氢酶检测、超氧化物检测以及还原糖检测。例如,WST®-8用于Cell Counting Kit-8中,WST®-1用于SOD Assay Kit-WST®中。甲臜物的最大波长如表中所示。WST®的水中溶解度在10 mM100 mM范围内。甲臜染料、尤其是二型染料的光谱较广并且随反应的进程变化。在像pH 1112的碱性条件下,甲臜染料的光谱也会发生很大变化。多数水溶性甲臜染料在高pH水平会变蓝。由于四唑盐在有光时不稳定,因此需要避光储存。

 

脱氢酶检测的原理如下图所示。脱氢酶氧化其底物并还原其辅酶β-尼古丁氨基腺嘌呤-二核苷酸(NAD)或β-尼古丁氨基腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)。接着NADHNADPH的电子经由如1-甲氧基吩嗪甲基硫酸盐(1-Methoxy PMS)或黄递酶等电子载体转移到四唑盐。1-Methoxy PMS是最稳定的电子载体之一且对与NADHNADPH的反应无选择性。另一方面,黄递酶在NAD(P)反应和四唑盐方面有更多特异性。

 

甲臜染料的摩尔吸光率(ε

 

 

 

 

 WST®WST是日本同仁化学研究所的注册商标

◎ 水溶性四唑盐
◎ 水不溶性四唑盐
◎ 电子载体